三種方法檢測乙肝表面抗原結果的比較
摘要】目的:通過乙肝表面抗原,比較三種方法學的優缺點。方法:采用化學
發光法檢測乙肝,然后對陽性標本分別用酶聯免疫吸附試驗和金標方法復檢。結
果:總數為
13207
份標本,化學發光方法檢測表面抗原陽性的標本為
1524
份,
ELISA
方法復檢后陽性標本數為
1415
,金標方法復檢后陽性標本數為
1241
。結論:
靈敏度化學發光方法最高、
ELISA
方法居中、金標方法最差;操作金標方法最簡
單、
ELISA
居中、化學發光方法稍難;金標方法假陰性假陽性率最高。因此,金
標方法只能進行篩檢,陽性或陰性都不能定診。
【關鍵詞】乙肝表面抗原;化學發光法;
ELISA
;金標法
【中圖分類號】
R156.3
【文獻標識碼】
B
【文章編號】
1005-0515(2011)12-0156-01
中國是乙型病毒肝炎的高發國家
,
根據流行病學調查
,
人群發生率較高
,
表面抗
原攜帶率約為
15%
[
1
]
。乙肝的實驗診斷對于其治療及預防有重要參考意義。
乙型肝炎病毒表面抗原
(HBsAg)
是由
Dane
顆粒的外殼和直徑
22 nm
的球型顆粒和
管型顆粒所組成[
1
]。
HBsAg
是
HBV
感染后第一個出現的血清學標志物
,
也是診
斷的重要指標之一。
HBsAg
陽性見于急性肝炎、慢性肝炎或無癥狀攜帶者。值得
注意的是在急性感染的恢復期
,
存在核心窗口期現象
,
即該時期
HBsAg
消失
,
抗
- HBs
還未出現的
,
此期可短至數天或長達數月。
目前檢測乙肝有三種比較常用的方法學,即酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
、金標
法、化學發光法。中國大多數臨床實驗室都采用酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
法來檢
測
HBsAg
。但對于
HBsAg
低濃度的標本
,
檢測時常因方法學的原因造成靈敏度較低
,
導致臨床出現漏檢
,
給病人帶來損失
,
尤其是需要臨床輸血的病人。;金標法
(Goldimmnnochromatography
,
GICA)
是在
ELISA
基礎上發展起來的一種檢測技術,
由于其具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點,也
廣泛應用于
HBsAg
的初篩;缺點式是此種方法靈敏度比
ELISA
更低,而且假陽性
率、假陰性率都很高。近年來發展起來的化學發光微粒子免疫分析法
(CMIA)
是靈
敏度非常高的方法。解決了低濃度
HBsAg
的檢測問題?,F將三種種方法對乙肝表
面抗原的檢測作一比較。
1
資料和方法
1.1
標本來源:收集牡丹江醫學院紅旗醫院檢驗科免疫室
2010
年全年常規做
乙肝
“
二對半
”
標本
13207
份,用半自動化學發光方法篩出乙肝表面抗原陽性的標
本
1515
份進行復檢,并通過金標法和酶聯方法進行比較。
1.2
方法:半自動化學發光方法原理:采用酶促化學發光,雙抗體夾心方法,用
辣根過氧化物酶作為標記酶,催化魯米諾發光,并在化學發光儀上讀出發光值并
計算含量,此種方法為定量方法。
金標方法原理:試劑條以膠體金為指示標記包被特異的抗體
,
應用免疫層析雙
抗體夾心原理檢測樣本中的乙肝表面抗原酶聯免疫吸附試驗
(ELISA)
法原理:采用
雙抗體夾心方法,用辣根過氧化物酶作為標記酶,催化
TMB
和過氧化氫產生有色
物質,加入酸性終止液后用酶標儀讀取光密度值進行計算并判斷陰陽性,此種方
法未定性方法。
2
試劑與儀器
半自動化學發光儀器為
GloRunner
型半自動化學發光儀,配套試劑為北京科
美化學發光試劑。金標試劑為廣州萬孚乙肝二對半金標板。
ELISA
試劑為上???/p>
華試劑,酶標儀為
Bio-Tek ELX800
,洗板機為
ELx50
洗板機。
3
檢測
所有標本先由半自動化學發光儀進行表面抗原檢測,陽性標本再用
ELISA
和
金表方法進行檢測。所有檢測嚴格按照標準
SOP
操作文件進行操作,質控品由黑
龍江省臨檢中心提供。
4
結果
總數為
13207
份標本,半自動化學發光方法表面抗原陽性的標本為
1524
份,
ELISA
方法復檢后陽性標本數為
1415
,金標方法復檢后陽性標本數為
1241
。
5
討論
從以上結果來看,半自動化學發光法陽性率最高,
ELISA
方法較化學發光法陽
性率低,金標方法陽性率最低?;瘜W發光方法要比
ELISA
方法敏感,化學發光方
法檢測弱陽性標本用
ELISA
方法檢測呈現陰性,同樣
ELISA
方法檢測弱陽性的標本
用金標方法同樣也呈現陰性。
ELISA
方法是國內主要檢測乙肝的方法,是一種操
作步驟比較簡單,靈敏度表較高的方法,所用儀器酶標儀的價格也不是很高,甚
至目測也可以報結果。金標法操作最為簡單,不需要任何儀器,很適合快速的篩
檢,但是此種方法的缺點也很明顯,檢測的靈敏度不高,存在一定假陽性率的問
題,金標方法檢測的結果,陰形可能存在假陰性,陽性也需要進行復檢。在實際
工作中,曾經有過金標表面抗原強陽性,但是經過化學發光和酶聯免疫方法測定,
變為陰性。因此金標方法檢測的結果不能作為定診的依據,必須經過其他的方法
進行驗證,只能作為乙肝的篩檢,其結果還必須進行確認?;瘜W發光法是近年發
展比較快的檢測方法學,我們所用的半自動化學發光方法采用的是酶促化學發光
法,其基本的檢測操作與
ELISA
方法一致,只有最后進行檢測的時候加入的酶促
底物不一樣,
ELISA
加入的是
TMB
和雙氧水,而酶促化學發光加入的是魯米諾和
雙氧水。
ELISA
用酶標儀檢測或根據檢測孔的顏色進行目測判斷結果;而酶促化
學發光方法必須用化學發光儀進行定性或定量分析檢測?;瘜W發光方法檢測靈敏
度要高于
ELISA
,對于
ELISA
方法檢測弱陽性的標本可以用化學發光方法進行復檢
并且進行定診。酶促化學發光方法與
ELISA
方法操作步驟相當,敏感度卻高很多。
缺點是酶促化學發光方法檢測必須依靠機器,不可以用肉眼觀察結果。另外,加
入酶促底物后,發光值會隨著時間的延長而進行性衰減,因此化學發光法進行讀
取數據時必須在規定的時間內讀取。經過我們監測發現,化學發光讀取發光值時
即使在規定的讀取時間內,每隔
1
分鐘檢測一次發光值,同一孔在不同的時間點
上的發光只相差很多,因此化學發光對于發光值的讀取最好在加入底物后同一時
間進行讀取,這一點對于定量檢測比較好。
參考文獻
[
1
]化學發光微粒子免疫分析法與酶聯免疫法測定乙肝表面抗原的比較
[
2
]劉秀琴
,
傅杭州
,
張曉俐
《海南醫學》
2010
年第
21
卷第
8
期